丁酸梭菌属于芽孢杆菌科，梭菌属，革兰氏阳性，有芽孢，孢子卵圆，偏心或次端生。可抵抗不良环境。

  丁酸梭菌是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，其直径为（0.6～1.2）×（3.0～7.0）µm，两端钝圆，中间部分轻度膨胀，细菌呈直杆状或稍有弯曲，单个或成对，短链，偶见有丝状菌体，周身鞭毛，能运动。孢子卵圆，偏心或次端生。革兰氏染色初培养的菌为阳性，菌稍长可变为阴性。

  丁酸梭菌：又名酪酸梭菌，是从健康人和动物肠道中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌。目前研究之后发现丁酸梭菌具有维持肠道菌群平衡、增强机体免疫功能、生成营养的东西、防治肠炎等良好的益生特性。

  2. 形态结构差异： 丁酸梭菌是一种革兰氏阳性细胞、厚壳芽孢形成细胞的肠道厌氧杆状菌，形态呈长条状或圆筒状；而丁 酸 菌 则 是 一 种 球 形 或 条 形 的 压 气 菜 单 细 胞 ，通常存在于反刍动物消化系统中。

  3. 生命活动方法不一样： 由于生存环境和代谢途径等原因,这两个微生物在生命活动方式上也存在一定的差异。例如，丁酸梭菌能够最终靠发酵过程产生乳酸、乙酸、甲烷等化合物，并参与人体肠道中蛋白质的降解和营养吸收；而丁酸菌则可通过纤维素、半纤维素等产生鞣质酸、丙酮等物质，参与反刍动物食物消化以及大气中甲烷的生成。

  因此，虽然丁 酸 梭 菌 和 丁 酸 菌 在名称上存在相似之处，但它们属于不一样的种类的微生物，在形态结构和代谢方式等方面也存在很明显区别。

  丁酸梭菌是一种厌氧菌，对氧气敏感。因此，在进行丁酸梭菌的激活之前，应该准备好无氧条件下的培养基和培养设备。下面是一般性的丁酸梭菌激活方法：

  1. 准备无氧培养基：将无氧培养基装入无菌试管中，密封好，放入恒温培养箱中加热到37℃，使其达到无菌状态。

  2. 取出一根丁酸梭菌冻存管，立即将其浸于预先准备好的无菌去离子水中润湿冻存管外表面（不要让去离子水进入冻存管内），然后将其移至一个已知为无菌的工作台上。

  3. 迅速将丁酸梭菌冻存管中的菌液接种到无菌的无氧培养基中，并快速回收盖子，密封好培养基。

  4. 将接种好的培养基放入无氧条件下，如恒温培养箱或高压锅中，保持恒温（一般为37℃）。

  5. 通常会在几个小时内出现丁酸梭菌的生长，但完全生长需要一些时间，一般为24-48小时。

  需要注意的是，丁酸梭菌的激活应在无菌条件下进行，并且必须在无氧条件下培养，以保证其生长和繁殖。在做相关操作时，请务必使用合适的个人防护装备，并遵守相关实验室安全规定。

  1、特点不同，丁酸梭菌在肠道中停留的时间比较久，长达72小时，而酪酸梭菌可在肠道中停留6-8小时。

  一种丁酸梭菌的清液发酵培养基及其高密度发酵丁酸梭菌方法，基于丁酸梭菌菌体与芽孢的氨基酸特性，结合氨基酸平衡优化了发酵培养基与补料分批发酵工艺，促进了丁酸梭菌的增殖与芽孢转化，提高丁酸梭菌清液发酵的芽孢数。

  本发明解决上述技术问题的方案在于：提供了一种负压条件下的高密度丁酸梭菌发酵生产的基本工艺，其包括：

  将丁酸梭菌种子液接种至丁酸梭菌发酵培养基中，用可溶性碱(如氨水)恒定ph至6.0～7.5，温度35～40℃，搅拌转速100～300r/min，采用负压抽气保持线mpa下进行厌氧发酵。

  在本发明提供高密度丁酸梭菌发酵生产的基本工艺中所述的丁酸梭菌发酵培养基为清液发酵培养基，其培养基含有葡萄糖、蛋白胨、硫酸铵、氨基酸、碳酸氢钠、抗坏血酸钠、金属盐等，ph值为7.0～7.5。其中添加氨基酸到丁酸梭菌清液发酵培养基中，用于发酵过程中调节氨基酸不平衡和消除碳溢流代谢；添加抗坏血酸钠到丁酸梭菌清液发酵培养基中，用于降低丁酸梭菌清液发酵培养基中的氧化还原电极和创造利于菌体繁殖生长的厌氧环境；添加氯化钙、硫酸锰和硫酸镁到丁酸梭菌清液发酵培养基中，用于促进丁酸梭菌的繁殖生长和芽孢生成。

  丁酸梭菌有比较臭的味道是丁酸固有的味道，对部分虫类有驱虫效果个别还有杀虫效果。

  丁酸梭菌是是从人的粪便和土壤中分离出丁酸梭菌，随后发现其厌氧培养的过滤物中含有较少的脂肪酸，具有极强的整肠作用，它可抑制肠道中的致病菌，促进肠道中有益菌如双歧杆菌和乳杆菌的生长

  丁酸梭菌的适宜生长繁殖温度为25-37℃，在自然界中主要存在于奶酪、天然酸奶、人与动物粪便及土壤中，能产生芽孢，可抵抗不良环境。

  根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽可能降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。低温、干燥、真空是用于菌种藏的重要手段。选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期地保持菌种原有的特性，同时也应兼顾到方法的经济和简便。在实际在做的工作中，往往多种条件同时使用,以提高保藏效果。

  ④ 定期对保藏菌种进行全方位检查，观察是不是发生明显的变化，若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。

  （1）方法：将常常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸保好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3个月移种一次，接着来进行保藏。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年 ~ 一年。有些甚至更长时间。

  细菌一般多用于营养琼脂或根据菌种规定选用培养基 4~6℃ 芽孢杆菌3~6个月，其它细菌每个月酵母菌 一般用麦芽汁琼脂或麦芽汁酵母膏琼脂 4~6℃ 一般4~6个月丝状真菌 一般用PDA琼脂、蔡氏 每4个月移植一次（每2个月移植一琼脂或麦芽汁琼脂等）

  优点是——简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用。

  必须按时进行检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。

  每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。

  保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于 2 %为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。

  本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理生化水平，并可防止水分蒸发，从而延长菌种的保藏期。1）方法：将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~ 0.5 %琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。

  取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上纸，121℃高压灭菌30min，取出置37℃温箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器内除去液体石蜡中的水分。

  将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端 1㎝为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。

  （3）特点 本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。

  ③ 使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一 边，再用接种针挑取培养物接种到新

  ④ 将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下

  ⑤ 液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严控，如太多，会影响菌种交换气体，使

  保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面1 ㎝为宜。

  ⑥ 制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多，否则分装到菌种培养基中易造成污染。