意酮法测定可溶性糖办法 (一)试验原理 糖在浓硫酸效果下，可经脱水反响生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可 与意酮反响生成蓝绿色糠醛衍生物，在一些范围内，色彩的深浅与糖的含量成正比，故可用 于糖的定量。糖类与慈酮反响生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm,故在此波长下 进行比色。 (二)资料 仪器设备及规划 1资料 12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。 2仪器设备 分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 nli和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的 移液枪，记号笔，吸水纸适量。 3试剂 (1)葱酮乙酸乙酯试剂：取剖析纯葱酮1 g,溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在 黑私自可保存数周，如有结晶分出，可微热溶解。 100 ug/L蔗糖溶液: %蔗糖规范液：精确称取蔗糖g,参加少数水溶解，移入100 ml容量瓶，加ml浓硫 酸，定容至刻度线。 ug/L蔗糖溶液的制造：用移液枪精确汲取1%蔗糖规范液1 ml,参加到100 ml容 量瓶，加蒸储水定容。 （3）浓硫酸（比重） （三）试验过程 .规范曲线参加规范的蔗糖溶液，然后按次序向试管中参加ml慈酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充沛振动，立行将试管放入沸水浴中，逐管精确保温1 min取出后天然冷却至室温, 以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘 制规范曲线，并求出规范线性方程。 管号 试剂 1, 23.45.67.89, 10100n 蔗糖/ml水/ml蔗糖量4 g020 1, 2 3.4 5.6 7.8 9, 10 100n 蔗糖/ml 水/ml 蔗糖量4 g 0 20 40 60 80 100 .取样 取不同种源砂生槐麦苗，用蒸微水冲刷洁净，随后用吸水纸吸干水分。将叶片切下，用 锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。 .可溶性糖的提取 将样品从冰箱中取出，称取一g,记载分量，运用镜子将样品夹入刻度试管中，参加 10 mL蒸播水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min （提取2次），提取液过滤入25 ml 容量瓶中，重复冲刷试管及残渣，定容至刻度。 .显色测定 汲取样品提取液ml于20 ml刻度试管中（重复2次），加蒸播水ml,然后参加ml 慈酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充沛振动，立行将试管放入沸水浴中，逐管精确保温1 min 取出后天然冷却至室温，以空白作参比（切勿遗忘对照）。在630 nm波长下测其光密度， 测定样品的光密度。 .核算可溶性糖的含量，核算公式： C X V 总 X D 样品含糖量 （％）= —X 100% W X V测 X 106 其间：C——在规范曲线上查出的糖含量g）, V总——提取液总体积（ml）, V测——测定时取用体积（ml）, D——稀释倍数， W——样品分量(g), 106——样品分量单位由g换算成n g的倍数 数据统计表 海拔 处理 编号 吸光度 规范曲 线斜率 规范方程求得 糖含量C (ug) 提取液量V (ml) 汲取样品液 体积a (ml) 稀释倍 数 安排分量(W) 核算所得可 溶性糖含量 平均值 2900 CK 1 1 1 1 1 2 1 1 3 1 1 4 PEG 1 2 1 1 2 2 1 2 3 1 2 4 3000 CK 2 1 1 2 1 2 2 1 3 2 1 4 PEG 2 2 1 2 2 2 2 2 3 2 2 4 3100 CK 3 1 1 3 1 2 3 1 3 3 1 4 PEG 3 2 1 3 2 2 3 2 3 3 2 4 3258 CK 4 1 1 4 1 2 4 1 3 4 1 4 PEG 4 2 1 4 2 2 4 2 3 4 2 4 3600 CK 5 1 1 5 1 2 5 1 3 5 1 4 PEG 5 2 1 5 2 2 5 2 3 5 2 4 3600 口 —1 CK 6 1 1 6 1 2 6 1 3 6 1 4 PEG 6 2 1 6 2 2 6 2 3 6 2 4 3700 CK 7 1 1 7 1 2 7 1 3 7 1 4 PEG 7 2 1 7 2 2 7 2 3 7 2 4 3800 CK 8 1 1 8 1 2 8 1 3 8 1 4 PEG 8 2 1 8 2 2 8 2 3 8 2 4 3900 CK 9 1 1 9 1 2 9 1 3 9 1 4 PEG 9 2 1 9 2 2 9 2 3 9 2 4 4000 CK 10 1 1 10 1 2 10 1 3 10 1

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