用还原糖测定仪测定葡萄糖淀粉酶活性的研究 史建国 楚杰 马耀宏王德源 (山东省科学院生物研究所250014) 电线 Email：I 摘要：本文研究了用还原糖测定仪测定葡萄糖淀粉酶活性的方法。在酶浓度 0-400UL／ML的范围内，酶浓度与还原糖拥有非常良好的曲线关系，用还原糖测定仪测 出未知浓度酶溶液反应的还原糖含量时，就可从图中查出相应的酶活性，该方法 快速，简单，准确率高。 关键词：葡萄糖淀粉酶，还原糖测定仪，还原糖 葡萄糖淀粉酶又称糖化型淀粉酶，或简称糖化酶，催化淀粉非还原端的n一1，4 键、Q一1，6键及Q．1，3键水解，游离出B一葡萄糖。 糖化酶的使用和生产的全部过程的监控中都有必要进行酶活力的测定‘”。最常用的糖化 酶活力测定方法是把底物可溶性淀粉和酶在特定的条件下保温，用氧化还原滴定 法测定产生的还原糖量确定葡萄糖淀粉酶的活力单位。该方法是把还原糖的生成 量按葡萄糖量计算，样品中的非葡萄糖还原性物质对测定结果有干扰，专～性差； 另外，该方法手工操作，繁琐、费时、人为滴定误差较大，给生产的全部过程控制带来 很多麻烦‘∞。 本文研究了一种葡萄糖淀粉酶活性的仪器测定法，即以标准样品的糖化酶配 成一系列相对酶活的浓度，与可溶性淀粉在特定条件下保温，用还原糖测定仪测 定还原糖，然后做出标准曲线，当测定未知样品的酶活性时，只要能够测出水解相同 底物产生的还原糖，即可从图中查出酶活性，此方法快速、准确，测定时间小于3 分钟，回收率在95．105％之间。为葡萄糖淀粉酶活性的快速测定提供了一种可靠的 分析方法‘3)(“。 1．材料与方法 1．1糖化酶制剂：无锡杰能科生物工程有限公司 12仪器： 还原糖测定仪：山东省科学院生物研究所研制 恒温水浴锅：重庆试验设备厂制造 l3方法：吸取25毫升2％可溶性淀粉溶液，置入50毫升容量瓶中，加5毫升PH4．6乙 酸一乙酸钠缓冲溶液，于40℃水浴预热lO分钟，准确加入葡萄糖糖化酶，摇匀，计 时，40℃保温糖化1小时，迅速加入15毫升0．1N氢氧化钠溶液，终止酶解反应，冷 却后用水定容至刻度，用还原糖测定仪测定还原糖生成量。 2结果与讨论 2．1标准曲线的制作 按以上方法糖化，用还原糖测定仪测定还原糖，结果如下： 绘制曲线 此曲线说明在一定底物浓度下，随着糖化酶酶量的增加，还原糖的产生量也随着 升高，但当酶量基本达到饱和，还原糖的产生趋于平缓。 2．2回收率实验 在上述酶溶液中，分别加入0．2％葡萄糖，作回收率实验，结果如下表 酶活 还原糖产生量 添加的葡萄糖量 测定的还原糖量 回收率 ul／ml g／100ml g／100ml g／100ml ％ f 50 0，2】0．2 0．4 95 75 0．33 0．2 0．54 105 100 0．46 0．2 0．65 95 150 0．63 0．2 0．84 105 200 0．71 0．2 0．92 105 250 0．74 0．2 0．95 105 『400 0．83 0．2 1．02 95 上述根据结果得出，回收率在95．105％之间，标准偏差为5％ 2．3未知样品酶活性的测定： 取一定量的固体发酵曲，按特殊的比例稀释，按1．3方法糖化，用还原糖测定仪测 定还原糖，经查表得出酶活性，结果如下： 样品 还原糖含量g／iOOml对应酶活力ul／ml 滴定法测定 1 ．0．73 2400 2430 2 0．43 950 986 对以上结果进行t检验，pO．01，所以以上结果无显著差异 3．结论： 还原糖测定仪是采用自动控制技术与生化技术相结合设计出的一种还原糖自 动测定系统，能自动控制反应条件，自动判断滴定终点，最大限度地解决了人为 的操作误差，提高了还原糖测定的速度和准确度。由以上结果能够准确的看出，采用还 原糖测定仪测定葡萄糖淀粉酶活性的方法具有快速，简单，准确率高的特点，是 一种可靠的葡萄糖淀粉酶活性的测定方法。另外，还原糖测定仪可大范围的应用于在 食品、发酵、环保、科研和教学等领域。用还原糖测定仪逐步取代传统的手工还 原糖测定法是现代分析技术发展的必然趋势。 参考文献： 1．史建国

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